登革病毒、黄热病毒和基孔肯雅病毒三重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及评价

作者：阚乃鹏; 翁育伟; 俞婷婷; 王金章^*

来源：中华实验和临床病毒学杂志, 2022, 36(06).

• 逆转录-聚合酶链反应
• 登革病毒
• 黄热病毒
• 基孔肯雅病毒

目的建立登革病毒(dengue virus, DENV)、黄热病毒(yellow fever virus, YFV)和基孔肯雅病毒(chikungunya virus, CHIKV)核酸的三重实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)检测方法。方法通过全球共享数据库下载DENV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型)、YFV、CHIKV全基因组序列进行比对分析, 针对这3种病毒的相对保守区域分别设计特异性引物和探针, 建立三重实时荧光定量RT-PCR检测方法, 以其他病毒核酸评价方法的特异性, 用病毒体外转录RNA评价方法的灵敏度, 以病毒高、中、低浓度核酸进行独立重复实验评价方法的重复性。DENV采用登革热患者血清进行验证, YFV、CHIKV采用模拟阳性标本进行验证, 采用健康人血清进行阴性验证。结果本方法与其他病毒核酸无交叉反应;对DENV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型)、YFV、CHIKV的最低检出限分别为21.55拷贝/反应、21.25拷贝/反应、21.85拷贝/反应、22.75拷贝/反应、22拷贝/反应、45.65拷贝/反应;各浓度检测Ct值的标准差在0.5以内、变异系数在3%以下;临床阳性标本及模拟阳性标本的检出率为100%, 健康人血清的阴性率为100%。结论本研究建立的DENV、YFV和CHIKV的三重实时荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性。

• 单位
  福建省疾病预防控制中心