盘状结构域受体1过表达慢病毒载体的构建及稳定过表达人胃腺癌BGC823细胞系的建立

作者：谢瑞霞; 李佩容; 张翠霞; 郭丽芳; 尚琪; 温萌; 张德奎

来源：兰州大学学报(医学版), 2017, 43(01): 9-14.

DOI：10.13885/j.issn.1000-2812.2017.01.002

• 胃癌
• 盘状结构域受体1
• 慢病毒载体
• 转染

目的构建盘状结构域受体1(DDR1)基因的慢病毒载体,建立稳定过表达DDR1的人胃腺癌BGC823细胞系。方法实时荧光定量PCR扩增DDR1目的基因,双酶切目的基因并插入LV5载体,构建LV5-DDR1慢病毒表达载体;随后转入人胚肾细胞293FT中进行慢病毒包装,用获得的慢病毒毒液感染人胃腺癌BGC823细胞系并通过嘌呤霉素筛选阳性表达细胞;根据转染情况,将细胞分为BGC823组(空白BGC823细胞)、BGC-NC组(转染空载慢病毒LV5的BGC823细胞)、BGC-DDR1组(转染过表达LV5-DDR1的BGC823细胞),分别用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分析DDR1 m RNA和蛋白的表达。结果经限制性内切酶鉴定及测序分析,成功构建了LV5-DDR1慢病毒表达载体并进行慢病毒包装。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测结果显示,与BGC-NC组比较,转染LV5-DDR1慢病毒表达载体组的BGC823细胞DDR1表达水平明显升高(P<0.01)。结论成功构建了DDR1慢病毒表达载体及DDR1稳定过表达的BGC823细胞系。

• 单位
  甘肃省消化系肿瘤重点实验室; 兰州大学第二医院