HRE/CMV启动子的克隆和缺氧调控活性的测定

作者:杨洁; 杜德伟; 李占亭; 贾林涛; 赵晶; 许彦鸣; 杨安钢; 孙脊峰
来源:中国病理生理杂志, 2007, (12): 2432-2435.

摘要

目的:将具有缺氧调控作用的多种缺氧反应元件(HRE)与CMV启动子组合,以获得缺氧应答启动子。将荧光素酶报告基因置于缺氧应答启动子的下游,通过检测荧光素酶活性的方法,方便地研究缺氧应答启动子缺氧诱导的作用。方法:合成多种HRE核苷酸序列,并设立HRE突变对照,克隆入pCI-neo中,构建HRE/CMV启动子。扩增HRE/CMV序列,定向亚克隆入pGL3-Basic中,获得HRE/CMV荧光素酶报告载体。瞬时转染HeLa细胞,在0.1%O2环境下培养细胞,并设立正常氧分压环境对照。检测荧光素酶的相对活性。结果:成功构建了HRE/CMV荧光素酶报告载体,其中mPGK-HRE/CMV载体表现出很好的缺氧诱导作用和高水平的表达。结论:mPGK-HRE/CMV启动子能够有效地进行缺氧诱导和调控工作。

  • 单位
    第四军医大学