探测应答调控蛋白PhoBNF20D自由态中存在的Pre-Active构象

作者：寇新慧; 刘乙祥^*; 刘兴弘; 李从刚; 刘买利; 姜凌^*

来源：波谱学杂志, 2019, 36(02): 164-171.

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• 活性构象
• 核磁共振(NMR)
• 应答调控蛋白
• 双组分信号转导系统(TCS)

PhoB是PhoR/PhoB双组分信号转导系统(TCS)中的应答调控蛋白,来自大肠杆菌,可以参与环境中自由Pi的调控应答.PhoB拥有保守的磷酸化位点D53,当Mg2+存在时,会变成活性构象,但是其中的机理尚不清楚,目前已经有报道指出,自由态的应答调控蛋白存在少量的活性构象,而且它们和蛋白的激活过程相关,但是这种活性构象一般不稳定,很难观测到,本文以PhoBNF20D作为模型,1H-15NHSQC和19FNMR谱图显示,自由态PhoBNF20D在溶液中存在pre-active构象,BeF3-可以稳定这种活性构象,而且Mg2+可以促进非活性构象到活性构象之间的转化,在BeF3-存在的情况下可以使PhoBNF20D形成完全的活性构象.同时我们利用Carr-Purcell-Meiboom-Gill (CPMG)弛豫弥散实验证明了PhoBNF20D存在两态交换.

• 单位
  中国科学院; 波谱与原子分子物理国家重点实验室; 中国科学院大学; 中国科学院武汉物理与数学研究所