miR-135a/b靶向SIRT1调控葡萄膜黑色素瘤细胞的迁移

作者：林永; 杨汝森; 叶菊秀; 陈晓燕^*

来源：中华眼视光学与视觉科学杂志, 2023, 25(02).

• 葡萄膜恶性黑色素瘤
• microRNA-135a
• microRNA-135b
• SIRT1
• 细胞迁移

目的: 研究microRNA-135a/b(miR-135a/b)对葡萄膜黑色素瘤(UM)细胞迁移能力的调控作用及其机制。方法: 实验研究。采用定量RT-PCR检测UM标本和癌旁组织中miR-135a/b的表达水平。将miRNA模拟物转染入UM细胞(M23和SP6.5)过表达miR-135a/b, 转染无义序列作为对照组(NC)。利用小RNA干扰技术和慢病毒过表达载体感染技术分别下调和上调细胞中SIRT1蛋白表达水平, 分别以无义小干扰RNA(siNC)和插入无义序列的慢病毒载体(Lv-NC)作为阴性对照。采用划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移能力。双萤光素酶报告实验用于鉴定miR-135a/b的靶基因。Western blot检测SIRT1蛋白的表达水平。采用独立样本t检验进行数据分析。结果: 定量RT-PCR结果显示miR-135a/b在UM组织较癌旁组织的表达水平明显下调(miR-135a:t=6.38, P=0.003;miR-135b:t=23.26, P<0.001)。划痕实验和Transwell实验结果显示, 与NC组相比, miR-135a/b过表达M23和SP6.5细胞迁移距离减小(miR-135a:t=36.01、8.98, 均P<0.01;miR-135b:t=27.53、10.51, 均P<0.01)且迁移细胞数量减少(miR-135a:t=7.04、7.02, 均P<0.01;miR-135b:t=5.01、7.32, 均P<0.01)。双萤光素酶实验证实, miR-135a/b能够明显抑制SIRT1野生组萤光素酶的荧光值(miR-135a:t=2.88, P=0.028;miR-135b:t=4.99, P=0.003);Western blot结果表明, 与NC组相比, 过表达miR-135a/b的M23和SP6.5细胞中SIRT1的蛋白水平下调(miR-135a:t=9.93、4.13, 均P<0.01;miR-135b:t=4.66、6.20, 均P<0.01)。siSIRT1转染后划痕实验和Transwell实验结果显示, 与siRNC组相比, M23和SP6.5细胞中下调SIRT1蛋白水平后细胞的迁移距离减小(siSIRT1-I:t=13.88、11.78, 均P<0.01;siSIRT1-II:t=31.20、6.27, 均P<0.01)且迁移细胞数量减少(siSIRT1-I:t=7.57、4.66, 均P<0.01;siSIRT1-II:t=5.58、3.25, 均P<0.05)。M23和SP6.5细胞中上调SIRT1蛋白水平同时过表达miR-135a/b, Transwell实验结果显示, 细胞的迁移数量较仅过表达miR-135a/b升高(miR-135a+Lv-SIRT1:t=4.10、2.75, 均P<0.05;miR-135b+Lv-SIRT1:t=2.99、2.49, 均P<0.05)。结论: miR-135a/b在UM中明显下调且通过靶向结合SIRT1 mRNA 3’’非翻译区抑制UM细胞的迁移, 提示miR-135a/b-SIRT1信号轴在UM发展中发挥重要作用。

• 单位
  温州医科大学附属眼视光医院