小鼠Cdc25B基因的真核表达载体构建及鉴定

作者：周晓敏; 孟峻^*; 刘岚清

来源：山西医科大学学报, 2019, 50(08): 1112-1115.

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2019.08.016

• 真核表达载体
• Cdc25B
• HEK293细胞

目的构建含有小鼠Cdc25B基因的真核表达载体pcDNA3.1-3xflag-Cdc.25B,并观察和验证其在真核细胞中的表达。方法目的基因Cdc25B经化学合成后,定向克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体中,经过限制性内切酶KpnⅠ和ApaⅠ进行双酶切和测序鉴定,构建真核表达载体pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B,应用脂质体法转染HEK293细胞,通过Western blot检测细胞内Cdc25B的表达。结果 pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B真核表达载体构建成功,将其转染HEK293细胞48 h,提取细胞蛋白,利用Western blot检测到细胞内Cdc25B的表达,并且测序结果与预期结果一致。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B。

• 单位
  内蒙古医科大学附属医院