结核分枝杆菌抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868的克隆表达及血清诊断学初步评价

作者：夏远志; 王雪枝; 刘海灿; 李马超; 赵秀芹; 楼永良; 吕建新; 万康林

来源：疾病监测, 2016, 31(04): 272-277.

DOI：10.3784/j.issn.1003-9961.2016.04.004

• 结核分枝杆菌
• 特异性抗原
• 克隆表达
• 酶联免疫吸附试验

目的评价结核分枝杆菌蛋白抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868的血清诊断价值和潜在应用前景。方法以结核分枝杆菌H37Rv标准株全基因组DNA为模板扩增得到Rv2654c、Rv1985c和Rv3868基因的完整序列,并与表达载体p ET-32a构建重组质粒。原核表达Rv2654c、Rv1985c和Rv3868蛋白,利用亲和层析的方法进行纯化。采用棋盘滴定的方法,确定各抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)最佳反应条件,并应用190份血清进行血清Ig G抗体检测,结合受试者工作特征曲线(ROC)对其诊断效能进行分析和评价。通过ROC计算各抗原组合的诊断效能,确定最佳组合方案。结果成功构建了重组蛋白,对重组后的片段进行测序,经BLAST比对与目的基因完全一致,且能够稳定表达。对经纯化后的3种蛋白进行ELISA检测,经统计学分析,Rv2654c、Rv1985c和Rv3868抗原的诊断效能分别达到73.16%、56.84%和71.05%。结合ROC得到最佳的抗原组合方案为Rv2654c+Rv3868,其敏感性、特异性和诊断效能分别达到78.95%、72.63%和75.79%。结论结核分枝杆菌重组抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868具有作为结核病诊断抗原的潜力,可以作为结核病免疫学快速诊断的候选蛋白。抗原组合Rv2654c+Rv3868具有较高的诊断效能,有较好的潜在应用价值。

• 单位
  传染病预防控制国家重点实验室; 温州医科大学; 生命科学学院; 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所