儿童神经母细胞瘤ZO-1基因甲基化状态临床意义分析

作者：刁玉巧; 曲凡; 杨明娟; 孟建辉; 陈健; 李梅

来源：中华肿瘤防治杂志, 2014, 21(03): 203-210.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2014.03.005

• 儿童
• ZO-1基因
• 甲基化特异性聚合酶链反应
• 甲基化
• 神经母细胞瘤

目的:探讨紧密连接蛋白(zonula occludens protein-1,ZO-1)基因启动子区甲基化状态在儿童神经母细胞瘤检测中的临床意义。方法:将2002-01-15-2012-12-15河北医科大学第四医院儿科35例确诊为神经母细胞瘤(Ⅳ期)患儿的骨髓标本作为研究组,20例非血液肿瘤患儿骨髓作为对照组。采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MS-PCR)方法动态检测研究组与对照组骨髓中ZO-1基因启动子区甲基化状态。逆转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)法检测两组ZO-1基因mRNA的表达情况,同时用ZO-1基因经MS-PCR扩增后的甲基化条带进行凝胶成像系统荧光强度半定量分析后的荧光强度(integrated option density,IOD)积分值,观察研究组化疗过程中IOD的动态变化。结果:MS-PCR检测结果显示,研究组治疗前32例出现ZO-1基因甲基化条带,阳性率为91.4%(32/35),对照组20例,均呈非甲基化状态,χ2=15.11,P<0.01;动态观察研究组31例ZO-1基因甲基化阳性率,治疗前为90.3%(28/31),化疗早期为80.6%(25/31),化疗后期为71.0%(22/31)。临床完全缓解3例,仍有2例可检出。治疗前与化疗早期、后期比较差异均无统计学意义,χ2=0.4,P=0.819。RT-PCR检测结果显示,研究组治疗前35例提取总RNA,3例见到ZO-1基因表达,阳性率为8.6%(3/35),对照组20例均有表达,阳性率为100.0%(20/20),χ2=16.616,P<0.001。动态观察研究组31例ZO-1基因表达阳性率,治疗前为9.7%(3/31),化疗早期为19.4%(6/31),化疗后期为29.0%(9/31)。临床完全缓解3例,2例未见到ZO-1基因表达。治疗前与化疗早期、化疗后期比较差异均无统计学意义,χ2=2.53,P=0.500。性别(t=0.530,P=0.25)、年龄(r=0.080,P=0.25)与IOD值线性无关。外周血白细胞总数与IOD值线性无关,r=0.093,P=0.25。骨髓中瘤细胞数与IOD值线性相关,且呈正相关,r=0.669,P=0.036 5。结论:ZO-1基因在儿童神经母细胞瘤中呈特异性高甲基化状态,导致该基因表达沉默,动态观察甲基化消失不明显,这与肿瘤恶性程度、发生、发展及转归密切相关,可能是预后不良因素之一。

• 单位
  河北医科大学第四医院; 昌邑市人民医院