嵌合轻链为模板导向筛选人源性抗肝癌抗体重链Fd片段

作者：包国强; 马庆久; 邢金良; 杨向民; 陈志南

来源：中国肿瘤生物治疗杂志, 2004, (03): 161-165.

DOI：10.3872/j.issn.1007-385X.2004.03.002

• 噬菌体抗体库
• 肝癌
• 导向筛选

目的:利用噬菌体抗体库和导向选择技术,以抗HAb18G嵌合抗体轻链为模板,筛选人源性抗肝癌抗体Fd片段。 方法:利用RT-PCR自肝癌患者外周血淋巴细胞中扩增全套人抗体重链Fd基因片段,克隆入含嵌合L链的展示载体 pComb3X,建立人-鼠杂合Fab噬菌体抗体库。然后,利用大肠杆菌表达的非融合HAb18GE为抗原进行亲和筛选,利用pⅢ 融合抗体的形式进行克隆鉴定,并对筛选出的杂合抗体进行初步的功能检测。结果:构建成功库容量为2×107PFU的杂合 人-鼠噬菌体抗体库,利用非融合表达的HAb18GE进行6轮筛选。ELISA及流式细胞仪检测,其中7个克隆呈特异性阳性反 应。其中克隆AP6-2和AP6-7亲和力较高,测序显示其基因序列相同,且与亲本抗体恒定区序列相同,属IgG2亚类,可变区属 VH3家族。结论:通过本实验,利用嵌合轻链为模板,进行Fd片段替换,成功筛选到人源性抗体Fd片段。

• 单位
  唐都医院; 第四军医大学