pcDNA3.1(-)/UBE2C质粒在Chang Liver细胞中的表达和鉴定

作者：黄湘; 谭家余; 乔亚峰; 王穗海; 邱玉林; 李明

来源：广东医学, 2009, 30(10): 1462-1465.

• UBE2C
• 真核表达质粒
• Chang Liver
• 构建
• 表达

目的构建pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒并建立人正常肝细胞Chang Liver的稳定表达株。方法采用RT-PCR法从HepG2细胞中克隆得到UBE2C cDNA全长序列,将它与pMD18-T载体连接。双酶切和测序鉴定后,再将UBE2C片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)。构建好的pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒经双酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将其转入Chang Liver细胞株中,经G418筛选,得到阳性克隆细胞株,再用Western blot法检测转染后UBE2C的蛋白表达水平。结果pcDNA3.1(-)/UBE2C质粒经双酶切鉴定和DNA测序证实,目的基因UBE2C的序列完全正确,真核表达质粒成功构建。Western blot检测显示,转pcDNA3.1(-)/UBE2C组UBE2C的蛋白表达水平高于转pcDNA3.1(-)组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功构建UBE2C基因的真核表达质粒并建立其稳定表达的Chang Liver细胞株,为下一步研究奠定基础。

• 单位
  南方医科大学; 嘉应学院医学院