靶向切割猪Y染色体的CRISPR/Cas9载体构建及功能验证

作者：霍梦飞; 孟繁明; 王塑天; 李颢; 杨化强

来源：华南农业大学学报, 2023, 44(02): 187-196.

DOI：10.7671/j.issn.1001-411X.202201022

• 猪
• CRISPR/Cas9
• Y染色体
• 性别控制
• 基因编辑

【目的】通过CRISPR/Cas9系统对Y染色体多位点切割，实现目标染色体的敲除，为畜禽性别控制提供新的手段。【方法】以CRISPR/Cas9技术为基础，寻找Y染色体上能被sgRNA特异性识别的多拷贝重复序列，并通过体外切割、定量分析、核型鉴定验证其对靶点的有效性。【结果】所设计的sgRNA能够在体外实现对靶片段的明显切割，且切割效率均达到了50%以上。基因的定量分析结果证明了其在细胞水平切割的有效性，且簇状重复序列切割效果明显优于散在重复序列；核型鉴定结果证实了细胞水平猪Y染色体的丢失。【结论】研究结果为后续构建染色体敲除猪，实现猪的性别控制奠定了基础。

• 单位
  广东省农业科学院动物科学研究所; 华南农业大学