GABRG2基因敲除小鼠和HT22细胞通过激活PKA/NF-κB信号通路影响MMP3的表达

作者：陈章平; 李信晓; 郭胜楠; 孙涛; 扈启宽^*

来源：宁夏医科大学学报, 2022, 44(07): 656-662.

DOI：10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2022.07.002

• GABRG2基因
• 基质金属蛋白酶
• 基因敲除
• 癫痫
• 小鼠
• HT22细胞

目的 探究GABRG2基因敲除后小鼠海马和HT22细胞中基质金属蛋白酶（MMP）3的表达变化及潜在参与机制。方法 动物实验：利用Cre/loxp重组酶系统所构建的GABAA受体γ2亚基（GABRG2）基因条件性敲除小鼠（GABRG2fl/wtCre+）模型为实验组，野生型小鼠作为对照组，用Western blot技术检测小鼠海马中GABRG2、PKA、p-PKA、NF-κB、MMP3蛋白的表达情况；免疫荧光技术观察海马中GABRG2、MMP3蛋白的表达情况；尼氏染色技术观察GABRG2基因缺失对小鼠海马神经元的影响。细胞实验：利用CRISPR/Cas9技术构建GABRG2基因敲除的HT22细胞为实验组，HT22细胞为对照组。Western blot技术检测各组细胞中GABRG2、PKA、pPKA、NF-κB、MMP3蛋白的表达情况；免疫荧光技术观察各组细胞中GABRG2、MMP3蛋白的表达情况。结果 动物实验：Westernblot结果显示，与对照组小鼠相比，实验组小鼠海马组织中GABRG2蛋白表达降低（P<0.05）,p-PKA、NF-κB、MMP3蛋白表达均升高（P均<0.05）,PKA蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）；免疫荧光结果显示，与对照组小鼠相比，实验组小鼠海马区GABRG2表达降低，MMP3表达升高，特别在海马CA3区表达明显升高。尼氏染色结果显示，与对照组小鼠相比，实验组小鼠海马神经元的结构松散，神经元离散程度提高。细胞实验：Western blot结果显示，与对照组细胞相比，实验组细胞GABRG2蛋白表达降低（P<0.05）,pPKA、NF-κB、MMP3蛋白表达均升高（P均<0.05）,PKA表达差异无统计学意义（P>0.05）；细胞免疫荧光结果显示，与对照组细胞相比，实验组细胞GABRG2的表达降低，MMP3的表达升高。结论 GABRG2基因缺失小鼠海马和HT22细胞均引起MMP3蛋白表达增高，其机制可能与上游PKA/NF-κB信号通路的调控有关。

• 单位
  基础医学院; 郑州大学第五附属医院; 宁夏医科大学