科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的比较细胞转染中单克隆与混克隆干扰基因效率。方法采用胃泌素特异干扰载体转染人胃癌原代细胞株L25,经G418抗性筛选获得混克隆和单克隆细胞,应用RT-PCR、Western blot和免疫荧光三种方法对混克隆细胞和单克隆细胞干扰胃泌素基因的效率进行比较。结果 RT-PCR结果显示混克隆细胞胃泌素mRNA表达水平被明显抑制。在挑取的10株单克隆细胞中,胃泌素的表达均受到干扰,其效果有差异,其中有2株单克隆细胞pshRNA-1、pshRNA-10胃泌素mRNA表达水平抑制率达到86%,抑制效率与混克隆细胞相同,其他8株单克隆细胞的平均抑制率为31%。Western blot和免疫荧光结果均显示单克隆细胞pshRNA-1、pshRNA-10与混克隆细胞在胃泌素蛋白水平的干扰效果相同。结论采用混克隆细胞进行生物学特性鉴定和后续基因表达水平研究,实验信息量大、周期短、污染几率小、可重复性强,是一种省时、简便、高效的方法。
- 单位
