基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒病毒样颗粒的构建与鉴定

作者：郜婷; 吴斯宇; 高彩霞; 夏苏东; 尹纪元; 王英英; 李莹莹; 石存斌; 王庆^*

来源：水产学报, 2023, 47(07): 150-159.

• 草鱼
• 草鱼呼肠孤病毒
• 重组杆状病毒
• 病毒样颗粒

为研究Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV)病毒样颗粒(VLPs)疫苗，实验利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统(BEVS)将具有免疫原性的GCRV-VP3/VP4/VP35蛋白进行GCRV-VLPs的组装。实验将编码VP35蛋白的GCRV-s11基因克隆入杆状病毒载体pFastBacHTATM，然后将鉴定正确的重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞，筛选得到重组穿梭质粒BacmidVP35。将穿梭质粒Bacmid-VP35以及实验室前期构建的重组穿梭质粒Bacmid-VP3、Bacmid-VP4分别转染Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒pFHB-VP35、pFHB-VP3以及pFHBVP4。利用Bac-PAK快速滴定试剂盒测定重组杆状病毒滴度，并通过间接免疫荧光(IFA)和蛋白质印迹法(Western blot)鉴定重组蛋白的表达情况。结果显示，实验获得了较高滴度的重组杆状病毒，并且重组蛋白在杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中正确表达。将成功表达蛋白的重组杆状病毒pFHB-VP35、pFHB-VP3以及pFHB-VP4共感染Sf9细胞组装GCRVVLPs，通过透射电镜(EM)观察VLPs的组装情况。结果显示，GCRV-Ⅱ的3个蛋白在Sf9昆虫细胞中可以完成自我组装，形成与天然病毒结构形似的VLPs，直径为65～72 nm。本实验结果为进一步研制安全、高效的GCRV-VLPs疫苗奠定了基础。

• 单位
  中国水产科学研究院珠江水产研究所; 天津农学院