透明质酸对大鼠肺泡巨噬细胞和肺成纤维细胞分泌蛋白酶的影响

作者：杨汀; 王辰; 庞宝森; 代华平; 何培英

来源：中国病理生理杂志, 2010, 25(03): 541-546.

• 透明质酸
• 基质金属蛋白酶
• 羟脯氨酸
• 巨噬细胞,肺
• 成纤维细胞

目的:研究不同大小透明质酸对大鼠肺泡巨噬细胞和肺成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶(MMPs)的诱导作用及对细胞周围胶原收缩和降解的影响。方法:Wistar大鼠肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞,Wistar乳鼠肺组织块培养获取肺成纤维细胞;透明质酸(简称HA)分为4个分子量:100kD、200kD、500kD、1000kD;将两种细胞混悬液分别与胶原溶液、不同分子量的透明质酸溶液混匀形成胶原凝胶后将凝胶漂浮于培养液中连续培养72h;每24h记录凝胶面积;留取第1个24h的培养上清液应用酶联免疫吸附法检测MMPs;72h后收集凝胶,应用分光光度测定法进行羟脯氨酸检测。结果:(1)不同分子量HA都可刺激肺泡巨噬细胞分泌MMP-9、MMP-12和MMP-13,与对照组比差异显著(P<0.05);其中以200kDHA作用最强。(2)不同分子量HA都可刺激肺成纤维细胞分泌MMP-1、MMP-9和MMP-13,与对照组比较,P<0.05;其中以100、200kDHA作用最为显著。(3)凝胶形成后24h,100、200、500kDHA使肺泡巨噬细胞凝胶面积明显缩小,与对照组比较有显著差异(P<0.05),并且这种作用一直持续到72h。(4)凝胶形成后24h,100、200、500kD的HA使肺成纤维细胞凝胶面积明显缩小,与1000kDHA组及对照组比较有显著差异(P<0.05));72h后,100、200kDHA使凝胶面积进一步缩小,与500、1000kDHA组及对照组比较,P<0.05。(5)4种分子量的HA与肺泡巨噬细胞共同孵育72h后,凝胶中羟脯氨酸含量与对照组比较均有显著减少,其中100、200kDHA组羟脯氨酸含量降低最显著(P<0.05)。(6)4种分子量的HA与成纤维细胞共同孵育72h后,凝胶中羟脯氨酸含量与对照组比较均显著减少,且不同分子量之间差异显著(P<0.05)。结论:(1)HA可以刺激大鼠肺泡巨噬细胞和肺成纤维细胞分泌多种与胶原降解相关的MMPs;其中200kDHA作用最强。(2)HA可以促进两种细胞凝胶收缩,以100、200、500kD的HA作用最显著。(3)HA可以降解细胞凝胶中的胶原,使其羟脯氨酸含量减低,以100、200kDHA作用最强。

• 单位
  中心实验室; 北京大学; 首都医科大学附属北京朝阳医院