高效、新T-DNA侧翼序列分离技术——Actail-PCR

作者：杨立勇; 刘灶长; 周立国; 罗华程; 罗利军

来源：中国农业科学, 2009, (04): 1447-1451.

• T-DNA
• 侧翼序列
• TAIL-PCR
• Actail-PCR T-DNA
• flank sequence
• TAIL-PCR
• Actail-PCR

【目的】建立一种有效分离T-DNA插入突变体侧翼基因组序列的方法。【方法】分离侧翼的目标基因组序列是利用T-DNA标签法研究植物功能基因组学的一个关键步骤,笔者发展稳定高效的Actail-PCR分离技术。该技术一侧引物来自于T-DNA载体,另一侧引物为一个复性控制引物。复性控制引物在3'端为一个14bp的随机简并引物,在5'端非目标尾部序列接上一个通用引物,中间由5个多聚脱氧次黄嘌呤核苷(poly(dI))连接。【结果】Actail-PCR技术将随机简并引物重新编辑成复性控制引物,在40℃的低严谨条件下,3'端的随机简并引物可以与T-DNA插入突变体的侧翼目标区段随机的结合,扩增得到目标片段,...

• 单位
  华中农业大学; 作物遗传改良国家重点实验室; 上海市农业生物基因中心