miR-9在TGF-β诱导的人肾小管上皮细胞纤维化中的作用

作者：石田田; 冯宁; 何丽洁; 王汉民

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2017, 33(03): 384-389.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.008084

• miR-9
• 上皮-间质转化(EMT)
• 转化生长因子β(TGF-β)
• 肾间质纤维化

目的探讨miR-9对转化生长因子β(TGF-β)诱导的HK-2肾小管上皮细胞纤维化过程中的作用。方法永生化的HK-2细胞给予5 ng/m L TGF-β刺激0、72 h,应用实时荧光定量PCR检测上皮钙黏素(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、1型胶原蛋白(Col1)、3型胶原蛋白(Col3)、纤连蛋白(fibronectin)、结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA和miR-9水平;Western blot法检测E-cadherin、α-SMA、Col1、Col3、fibronectin、CTGF的表达变化;给予5 ng/m L TGF-β刺激或不用TGF-β刺激的HK-2细胞,培养48 h,转染miR-9的模拟物、模拟物阴性对照,采用实时定量PCR及Western blot法检测上述指标的变化。生物信息学方法预测miR-9的靶基因,荧光素酶报告基因法进行验证。结果 TGF-β刺激72 h后,HK-2细胞中的miR-9、α-SMA、Col1、Col3、fibronectin、CTGF的水平增加,而E-cadherin水平下降;给予HK-2细胞转染miR-9模拟物后,miR-9、α-SMA、Col1、Col3、fibronectin、CTGF含量增加,E-cadherin含量下降;给予HK-2细胞TGF-β刺激48 h并转染miR-9抑制剂后,miR-9、α-SMA、Col1、Col3、fibronectin、CTGF含量下降,E-cadherin含量增加。通过Target Scan进行生物学信息预测,结果显示E-cadherin可能为miR-9的靶基因,并通过荧光素酶报告基因确证。结论 miR-9在人HK-2细胞转分化中起重要作用,并且通过抑制E-cadherin的表达而促进HK-2细胞转分化及纤维化。miR-9抑制剂可逆转TGF-β刺激HK-2细胞转分化及纤维化。

• 单位
  第四军医大学; 西京医院肾脏内科