miR-20a-5p通过下调BMPR2促进人脑微血管内皮细胞增殖和抑制凋亡

作者：蒲举; 季一飞^*; 龙继发; 周华勇; 杨旭; 张扬威; 柳华

来源：西部医学, 2021, 33(12): 1747-1752.

• 微小RNA-20a-5p
• 骨形成蛋白2型受体
• 人脑微血管内皮细胞
• 增殖
• 凋亡
• PI3K/AKT信号通路

目的探讨微小RNA-20a-5p(miR-20a-5p)是否通过下调骨形成蛋白2型受体(BMPR2)基因调控人脑微血管内皮细胞增殖和抑制凋亡。方法在永生化人脑微血管内皮细胞(hCMEC/D3)中分别转染miR-20a-5p mimics, BMPR2小干扰RNA(si-BMPR2)或过表达质粒(pcDNA-BMPR2)。实时定量PCR(qRT-PCR)测定miR-20a-5p表达,免疫印迹(Western Blot)检测BMPR2、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、活化的的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved-caspase-3)、磷酸化-磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡。生物信息学预测与荧光素酶报告基因检测分析miR-20a-5p和BMPR2之间的关系。共转染miR-20a-5p mimics和pcDNA-BMPR2,利用上述方法评估其对细胞增殖、凋亡和PI3K/AKT信号通路的影响。结果过表达miR-20a-5p明显增加hCMEC/D3的细胞活性,CyclinD1、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平,显著减少细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白表达水平(P<0.05)。低表达BMPR2明显提高hCMEC/D3的细胞活性、CyclinD1蛋白表达水平,显著减少细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白表达水平(P<0.05),高表达BMPR2时具有相反的效果。miR-20a-5p靶向BMPR2,并调控BMPR2蛋白的表达。高表达BMPR2可以逆转miR-20a-5p促hCMEC/D3增殖、PI3K/AKT信号通路活性和抑凋亡的作用。结论 miR-20a-5p通过靶向BMPR2激活PI3K/AKT信号通路,促进人脑微血管内皮细胞的增殖,并抑制凋亡。

• 单位
  川北医学院; 西南交通大学; 南充市中心医院; 神经内科; 成都市第三人民医院; 第二临床医学院