pMaxGFP导入人肝癌HepG2细胞中磷酸钙转染法的应用条件优选

作者：徐慧; 龚霞; 彭剑雄

来源：山东医药, 2014, 54(35): 23-26.

• 磷酸钙转染法
• 细胞转染
• 细胞存活率
• 细胞状态

目的优选出pMaxGFP导入人肝癌HepG2细胞中磷酸钙转染法的应用条件。方法取对数生长期的人肝癌HepG2细胞,采用磷酸钙转染法将pMaxGFP导入HepG2细胞,转染前1 h换不同血清浓度的新鲜培养液培养HepG2细胞,血清浓度分别为无血清、1%、2%、5%、10%、15%。转染48 h后以倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,评估转染效率,同时以原位台盼蓝染色检测转染后的细胞存活率,优选出最适血清浓度。在最适血清浓度条件下,磷酸钙转染法将pMaxGFP转染贴壁状态和悬浮状态的HepG2细胞,共分为A、B、C、D、E 5组,分别代表转染贴壁状态、悬浮状态3×104细胞/孔、4×104细胞/孔、5×104细胞/孔、6×104细胞/孔。转染48 h后在荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,评估转染效率,同时以原位台盼蓝染色检测转染后的细胞存活率,优选出最适的细胞状态和细胞密度。结果 48 h后,无血清组HepG2细胞大量死亡,而其他组有较少部分细胞死亡。1%、2%、5%、10%、15%血清浓度的转染效率分别为30.92%±1.29%、30.10%±1.05%、21.27%±0.63%、19.10%±0.51%、10.44%±1.42%,血清浓度为1%、2%时的转染效率明显高于其他血清浓度,P<0.05;1%、2%、5%、10%、15%血清浓度的细胞存活率分别为76.01%±0.94%、89.68%±0.68%、92.38%±1.02%、93.36%±1.35%、93.49%±0.91%,血清浓度为2%时的细胞存活率明显高于1%血清浓度。在转染培养基血清浓度为2%条件下,A、B、C、D、E组转染效率分别为30.74%±0.50%、6.38%±0.28%、31.41%±0.42%、30.94%±0.47%、1.41%±0.27%,A、C、D组转染效率明显高于B、E组,P﹤0.05;A、B、C、D、E组细胞存活率分别为91.76%±0.99%、88.40%±1.29%、88.38%±1.08%、87.48%±0.78%、64.45%±0.55%,A、B、C、D组细胞存活率明显高于E组。结论优选出pMaxGFP导入人肝癌HepG2细胞中的磷酸钙转染法应用条件为转染培养基中血清浓度2%、悬浮状态下细胞密度为4×104细胞/孔或5×104细胞/孔。

• 单位
  中南大学湘雅医学院