辐照促进肿瘤细胞分泌cGAMP和NO增强Ⅰ型干扰素应答

作者：丁锦秋; 曹李敏; 孙雨梦; 胡楠; 王丽; 张蓓^*; 肖晖^*

来源：免疫学杂志, 2022, 38(04): 277-286.

DOI：10.13431/j.cnki.immunol.j.20220039

• 放疗
• cGAMP
• NO
• Ⅰ型干扰素应答
• LRRC8/VRAC

目的 揭示辐照诱导环鸟苷酸-腺苷酸（cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate, c GAMP）和一氧化氮（nitric oxide, NO）调节抗肿瘤Ⅰ型干扰素表达的新机制。方法 RT-qPCR技术检测Ifnb、Cxcl10、Il6和Nos2基因的表达。免疫印迹技术检测cGAS-STING信号通路激活和诱导型一氧化氮合酶（nitric oxide synthase 2 inducible, iNOS）的蛋白表达；液相色谱-质谱联用技术（LC-MS/MS）和ELISA检测细胞内外cGAMP的含量。通过使用LRRC8 volume-regulated anion channel(LRRC8/VRAC)和iNOS抑制剂阻断cGAMP释放和NO产生。结果 辐照处理肿瘤细胞MC38后，显著诱导了p-STING、p-TBK1和p-IRF3的表达；相应地，Ifnb、Cxcl10和Il6基因的表达也大幅度升高（P<0.001）；辐照处理Cgas或Sting基因敲除的MC38细胞后，Ifnb、Cxcl10和Il6基因的表达明显下降（P<0.001）。此外，辐照处理MC38细胞后，在胞外上清中可以检测到细胞释放出来的免疫调节分子cGAMP(P<0.001)和NO(P<0.01);DCPIB抑制LRRC8/VRAC导致c GAMP释放减少（P<0.05），同时Ⅰ型干扰素应答降低（P<0.001）。辐照还可以诱导MC38细胞表达iNOS，用SMT抑制iNOS后，细胞NO产生减少（P<0.05）,Ⅰ型干扰素应答也降低（P<0.05）。结论 本文证实c GAS-STING信号通路在辐照诱导抗肿瘤的Ⅰ型干扰素应答中至关重要，并揭示肿瘤细胞通过外运或分泌具有免疫调节功能的小分子cGAMP和NO可以进一步放大Ⅰ型干扰素应答，因此发现了辐照诱导Ⅰ型干扰素表达的新机制。

• 单位
  基础医学院; 青岛大学; 中国科学院上海巴斯德研究所