同源重组法构建枯草芽孢杆菌dhbC基因缺失突变株和回复株

作者：余贤美; 林超; 杨芩; 李锐; 贺春萍; 郑服丛

来源：热带作物学报, 2009, 30(10): 1517-1521.

DOI：10.3969/j.issn.1000-2561.2009.10.024

• 枯草芽孢杆菌
• 同源重组
• 缺失突变
• 基因回复

为了验证dhbC基因的功能,以质粒pEGFP-N1为模板,通过PCR扩增获得新霉素抗性基因(neor)DNA片段,构建重组质粒pMD18-neo,电击转化法将pMD18-neo导入枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CAS15感受态细胞中,使neor基因片段与dhbC基因片段发生置换,获得dhbC基因缺失突变株。再通过电击转化将dhbC基因全长编码序列导入dhbC基因缺失突变株CAS15 dhbC-del,获得dhbC基因回复株CAS15dhbC-com。经CAS平板法检测表明,CAS15 dhbC-del不能产生橘黄色晕圈,而CAS15 dhbC-com产生与CAS一致的橘黄色晕圈,证明了dhbC基因与嗜铁素的合成密切相关。

• 单位
  中国热带农业科学院环境与植物保护研究所; 农业部; 海南大学