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摘要
目的 基于果蝇无翅基因/β-连环蛋白（Wnt/β-catenin）信号通路，研究尪痹片（WBT）干预去势后胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠的骨形成机制。方法 48只雌性SD大鼠经随机数字表法分为空白对照组、去势组、CIA组、去势CIA组、去势+WBT组、CIA+WBT组、CIA+甲氨蝶呤（MTX）组、去势CIA+WBT组，每组6只。去势法制备肾虚证模型，CIA法制备类风湿关节炎模型，WBT采用每日0.63 g/kg灌胃，MTX采用每周1.05 mg/kg结合生理盐水灌胃，其余组均予生理盐水灌胃，56日后取材。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）水平，蛋白质免疫印迹（Western Blot）检测Wnt3a、Wnt10b、β-catenin、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、Dickkopf相关蛋白-1 (DKK-1)、Runt相关转录核心因子2(Runx2)、碱性磷酸酶（ALP）、核酸内切酶Dicer蛋白表达量，逆转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测DKK-1、微小RNA(miR)-335-5p mRNA表达量。结果 去势后大鼠逐渐出现弓背蜷缩、小便色淡、体温下降、毛发枯槁、垂尾等症状，CIA造模后出现关节肿胀变形、活动受限。与空白对照组比较，去势组Runx2表达降低，CIA组DKK-1、cAMP、cGMP表达增加，去势CIA组GSK-3β、Runx2、ALP表达降低，DKK-1、cAMP、cGMP表达增加，去势CIA+WBT组miR-335-5p表达上调（P<0.05）。与去势组比较，去势+WBT组cAMP、cGMP、cAMP/cGMP、Wnt3a、Runx2、ALP、Dicer蛋白表达升高（P<0.05）。与CIA组比较，CIA+WBT组Runx2表达上调（P<0.05）。与去势CIA组比较，去势CIA+WBT组的Wnt3a、Wnt10b、β-catenin、GSK-3β、Runx2、ALP表达均上调，DKK-1降低（P<0.05）。结论 尪痹片可以抑制DKK-1表达、激活Wnt/β-catenin通路、提高miR-335-5p水平，促进去势CIA大鼠的骨形成。
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