CHO细胞高密度流加工艺参数优化

作者：纪海姣; 于妍; 杨金龙; 王鹏银^*

来源：生物技术, 2023, 33(01): 121-128.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2023.01.0018

• 重组全人源PCSK9
• 高密度流加
• CHO细胞
• 培养基优化
• 蛋白滴度

[目的]优化细胞接种密度、培养基、细胞培养温度等参数，提高生产细胞株PCSK9蛋白表达滴度。[方法]试验分四步进行，(1)探讨几款市售培养基优化组合后对CHO细胞株蛋白表达滴度的影响；(2)探讨10.0×106、15.0×106、50.0×106 cells/mL高密度接种流加过程培养基、降温时间等对CHO细胞蛋白滴度的影响；(3)在(2)实验数据基础上继续优化，通过更换培养基继续探讨高密度流加工艺的可行性；(4)在反应器对实验数据进行工艺验证。[结果](1)CHO细胞PCSK9蛋白滴度提升至2.6 g/L,蛋白滴度成倍增长；(2)15.0×106 cells/mL接种，30.0×106 cells/mL降温至34℃,继续优化培养基1#、2#配比，蛋白滴度提升至4.5 g/L,反应器工艺验证，细胞生长状态稳定，蛋白滴度突破3.8 g/L;(3)继续筛选市售培养基，成功实现80.0×106 cells/mL高密度流加接种，蛋白滴度提升至7.5 g/L。[结论]以贝谙基Eden-B600、Eden-400S培养基能够实现CHO细胞80.0×106 cells/mL的高密度接种，流加培养D15蛋白滴度突破7.5 g/L。在细胞流加培养过程可以通过培养基成分优化、提高接种细胞密度等改善高密度流加工艺细胞株生长状态，提高目标蛋白产量。以国产培养基替换进口Sigma EX-CELL Advanced CHO Fed-Batch Medium极大地降低了生产成本。

• 单位
  天士力生物医药股份有限公司