基于报告基因的抗CD3×GPRC5D双特异性抗体生物学活性测定方法建立

作者：李娜; 吴振华; 梅小芬; 柳颖; 陈瑶; 陈娟; 蒋美珠; 王海彬^*

来源：中国新药杂志, 2022, 31(15): 1474-1479.

• 抗CD3×GPRC5D双特异性抗体
• 生物学活性
• 报告基因法

目的:建立抗CD3×GPRC5D双特异性抗体(bispecific antibody, BsAb)生物学活性的报告基因测定方法。方法:构建Jurkat/NFAT-Luc转基因细胞株作为效应细胞，MM.1R细胞系作为靶细胞，建立和优化抗CD3×GPRC5D双特异性抗体生物学活性检测方法并进行方法学验证。分别用优化后的报告基因法和PBMC杀伤试验评价不同类型的抗CD3×GPRC5D双特异性抗体生物学活性。结果:报告基因法优化后确定靶细胞为MM.1R细胞，细胞铺板密度为2×104个·孔-1,效靶比1∶1,抗体起始浓度为20μg·mL-1,2倍稀释1次后，再6倍梯度稀释，共10个浓度点，诱导时间6 h。方法验证结果说明该方法具有良好的专属性，制备50%,75%,100%,150%和200%理论效价样品，进行准确性、精密度和线性验证，结果显示生物学活性回收率在97.85%～106.51%,变异系数均<10%;相对效价理论值与实测值直线回归分析相关系数为0.997 8。同时，该方法适用于各类抗CD3×GPRC5D双特异性抗体，均有较好的剂量反应曲线，且与PBMC杀伤试验结果具有较好的一致性。结论:本研究成功建立抗CD3×GPRC5D双特异性抗体生物学活性的报告基因检测方法，该方法具有较高的准确性和精密度，且特异性良好，可作为此类双特异性抗体活性评价的常规方法。