腺病毒介导的激活大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞中NO/cGMP通路的实验研究

作者：袁慧星; 王涛; 詹鹰; 王少刚; 刘继红; 叶章群

来源：临床泌尿外科杂志, 2014, 28(08): 616-620+628.

DOI：10.13201/j.issn.1001-1420.2013.08.028

• 勃起功能障碍
• 基因治疗
• RNA激活
• iNOS基因
• 大鼠

目的:探讨靶向大鼠iNOS基因的shRNA重组腺病毒载体对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞iNOS基因的激活作用,为阴茎勃起功能障碍(ED)的基因治疗提供实验依据。方法:将前期构建的重组腺病毒Ad5-iNOSrshRNA-EGFP(AdU6/shiNOS)和对照病毒AdU6/shControl,分别转染大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞,分别在不同病毒MOI(25,50,75)值下72小时后采样检测。采用realtime RT-PCR半定量检测AdU6/shiNOS对细胞iNOS基因mRNA表达影响;Western-blot法检测海绵体平滑肌细胞iNOS蛋白表达变化。然后培养基中加LArg(10mmol/L),用酶联免疫法检测病毒转染72小时后海绵体平滑肌细胞内cGMP的浓度变化,记录AdU6/shiNOS对平滑肌细胞内cGMP的影响。结果:AdU6/shiNOS转染大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞72小时后,和空白对照组、阴性对照组相比iNOS基因在mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P<0.05),呈剂量依赖性,MOI=75时RNAa效果最好。而且转染72小时后,实验组原代平滑肌细胞内cGMP水平显著高于对照组及空白组(P<0.05)。结论:利用腺病毒介导的RNAa技术,提高海绵体平滑肌细胞iNOS基因表达获得成功,可以增加阴茎海绵体平滑肌细胞cGMP水平,激活了NO/cGMP通路,这为勃起功能障碍的基因治疗研究开辟了新的方向。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院