联合加入二氢杨梅素与吡柔比星培养的人肝母细胞瘤细胞活性及心肌细胞毒性反应观察

作者：麦天赋; 冼晓晖; 黄敏诗; 庄智杰; 李明意^*

来源：山东医药, 2022, 62(02): 7-12.

• 二氢杨梅素
• 吡柔比星
• 肝母细胞瘤
• 心肌细胞
• 细胞增殖
• 细胞凋亡

目的观察二氢杨梅素(DHM)和吡柔比星(THP)单用及联合培养对人肝母细胞瘤(HB)细胞株HuH-6活性和人心肌细胞株AC16毒性反应的影响,探讨DHM与THP联合化疗抗HB的作用机制。方法取HuH-6和AC16细胞进行培养,分别加入梯度浓度(0、100、150、200、250、300μmol/L) DHM进行干预,采用CCK-8法检测细胞活性,筛选HuH-6细胞活性最低而AC16细胞活性无明显变化的作用浓度作为DHM的最佳作用浓度。以最佳作用浓度的DHM分别与梯度浓度(4、6、8、10μmol/L) THP联合作用来处理HuH-6和AC16细胞,采用CCK-8法检测HuH-6细胞活性,采用LDH释放试验检测AC16细胞毒性,筛选在有效抑制HuH-6细胞活性的同时,对AC16细胞毒性作用最弱的THP最佳作用浓度用于后续实验。将AC16细胞分为4组,Ctrl组正常培养; DHM组加入DHM; THP组加入THP;DHM+THP组同时加入DHM和THP。采用探针法检测各组细胞内ROS生成水平,Brd U掺入法检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞早期和晚期凋亡情况,Western blotting法检测细胞p-Akt/Akt、细胞增殖相关蛋白PCNA以及细胞凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax、cleaved caspase-3/caspase-3、cleaved caspase-9/caspase-9水平。结果当250μmol/L的DHM与6μmol/L的THP联合作用时,在有效抑制HuH-6细胞活性的同时对AC16细胞的毒性作用最弱,故选择该浓度作为DHM与THP联合作用的最佳作用浓度。与Ctrl组比较,DHM组、THP组、DHM+THP组ROS水平均升高(P均<0.05),与THP组比较,DHM+THP组ROS水平降低(P <0.05)。与Ctrl组相比,DHM组、THP组、DHM+THP组Brd U阳性率均降低(P均<0.05);与DHM组比较,THP组、DHM+THP组Brd U阳性率降低(P均<0.05),DHM+THP组与THP组比较差异无统计学意义(P> 0.05)。与Ctrl组相比,DHM、THP、DHM+THP组早、晚期凋亡率均增加(P均<0.05);与DHM组相比,THP组早期凋亡率降低而晚期凋亡率增加(P均<0.05),DHM+THP组早、晚期凋亡率均增加(P均<0.05);与THP组相比,DHM+THP组早期凋亡率升高而晚期凋亡率降低(P均<0.05)。与Ctrl组相比,DHM组和DHM+THP组p-Akt/Akt降低,DHM组、THP组和DHM+THP组PCNA、Bcl-2/Bax水平降低,DHM组、THP组和DHM+THP组cleaved caspase-3/caspase-3、cleaved caspase-9/caspase-9水平升高(P均<0.05);与DHM组和THP组相比,DHM+THP组p-Akt/Akt、PCNA、Bcl-2/Bax水平降低,cleaved caspase-3/caspase-3、cleaved caspase-9/caspase-9水平升高(P均<0.05)。结论 DHM与THP联合作用时抗HB肿瘤细胞效果增强且心肌细胞毒性不叠加; DHM可能通过阻断Akt活化从而抑制PI3K/Akt信号通路,增强THP对HuH-6细胞的增殖抑制作用及凋亡促进作用,DHM与THP联合化疗对HB有一定的治疗潜力。

• 单位
  广东医科大学附属医院