鸡lncRNA-CEPT8启动子验证及活性核心区域筛选

作者：金晶; 余昕健; 靳锴; 李婷婷; 张晨; 左其生^*; 李碧春^*

来源：中国家禽, 2020, 42(06): 15-20.

DOI：10.16372/j.issn.1004-6364.2020.06.003

• 鸡
• 启动子
• lncRNA
• 核心区域

研究旨在筛选鸡lncRNA-CEPT8启动子核心区域并验证其启动活性。采用qRT-PCR检测lncRNA-CEPT8在鸡不同组织中表达情况。生物信息学预测lncRNA-CEPT8启动子区域,PCR扩增启动子并构建pEGFP-lncCEPT8重组载体,转染DF-1细胞后48 h进行荧光观察。再构建启动子系列缺失载体(pGL3-p1、pGL3-p2、pGL3-p3、pGL3-p4、p GL3-p5),分别转染DF-1细胞后48 h检测双荧光素酶活性,分析缺失载体的启动活性。结果表明,lncRNA-CEPT8在鸡生殖嵴中特异性高表达,pEGFP-lncCEPT8重组载体转染DF-1细胞后有绿色荧光。缺失载体p GL3-p4与pGL3-p3相比,活性极显著下降(P<0.01)。研究明确了lncRNA-CEPT8上游-1 174～-1 bp处为启动子,且-627～-429 bp是启动子核心区域,为进一步研究其表达调控机制提供理论依据。

• 单位
  江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室; 扬州大学; 中国科学院昆明动物研究所