自剪切多肽P2A对自然杀伤细胞的高效诱导扩增作用的研究

作者：陈雪梅; 张曦; 林建炜; 薛祯智; 刘韬^*

来源：中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2019, 9(05): 282-291.

DOI：10.3877/cma.j.issn.2095-1221.2019.05.005

• 自剪切多肽P2A
• 自然杀伤细胞
• 滋养层细胞
• 细胞免疫治疗

目的改进现有过继性人自然杀伤(NK)细胞体外诱导、分化及扩增方法,实现高效定向分化及大量扩增NK细胞的目的。方法利用自剪切多肽P2A连接IL-15和4-1BBL基因,通过慢病毒感染和药物筛选的方法制备稳定表达IL-15和4-1BBL的K562滋养层细胞株。该方法可刺激人PBMC细胞向NK细胞分化及高效增殖。实验结果以x±s表示并用两样本t检验进行比较。结果经该方法培养的CD3-CD16+56+NK细胞增殖倍数达到(4480.43±37.80)倍;CD3-CD16+56+NK细胞纯度达到94.79﹪;细胞内表达IFN-γ和TNF-α的NK细胞比例为(63.07±3.37)﹪和(54.85±2.04)﹪,分别高于对照组(16.28±2.86)﹪和(14.53±1.15)﹪(t=62.25,22.66,P均<0.01);细胞分泌至培养上清液中的IFN-γ和TNF-α浓度为(111.39±6.95) pg/ml和(32.76±3.23) pg/ml,分别高于对照组(44.99±4.74)pg/ml和(11.09±2.45) pg/ml(t=20.56,7.21,P均<0.01);在体外,该方法培养的NK细胞对K562细胞的杀伤效率为(78.52±7.36)﹪,高于对照组(48.53±6.66)﹪(t=11.56,P <0.01);对H520细胞的杀伤效率为(65.03±3.27)﹪,高于对照组(35.85±3.99)﹪(t=11.35,P <0.01)。结论利用自剪切多肽P2A构建稳定高表达的IL-15和4-1BBL的K562滋养层细胞株,从而提高了NK细胞增殖倍数、纯度和细胞毒性。

• 单位
  深圳大学; 深圳市罗湖区人民医院科研成果展示