抑制囊泡转运对大鼠内皮祖细胞增殖及钙库操纵性钙内流的影响

作者：张弢; 王彦伟; 杨杰; 袁方正圆; 张继航; 黄岚

来源：中国病理生理杂志, 2016, 32(04): 591-596.

• 内皮祖细胞
• 囊泡转运
• 瞬时受体电位通道1

目的:研究囊泡转运在大鼠内皮祖细胞(EPCs)增殖及钙库操纵性钙内流(SOCE)调控中的作用。方法:密度梯度离心法分离获取、并用ac LDL-Di I和FITC-UEA-I荧光双染鉴定脾源性EPCs。布雷菲德菌素A(BFA)抑制囊泡转运,CCK-8法和实时无标记细胞功能分析仪观察EPCs增殖变化,流式细胞术检测凋亡情况,并检测囊泡转运关键蛋白ADP核糖基化因子GTP酶活化蛋白1(ARFGAP1)的表达。激光共聚焦显微镜观察囊泡转运抑制后SOCE并用Western blot检测SOCC复合体蛋白表达,进一步采用RNA干扰的方式观察囊泡转运对瞬时受体电位通道1(TRPC1)蛋白表达及SOCE的影响。结果:双染鉴定大鼠脾源性EPCs阳性率为82.53%±6.12%。BFA显著抑制EPCs的增殖但对凋亡无明显影响,同时ARFGAP1表达也明显降低,说明EPCs的囊泡转运受到抑制。抑制EPCs囊泡转运显著下调TRPC1的表达,并降低SOCE。si TRPC1使EPCs的SOCE下降,但siTRPC1预处理并抑制囊泡转运并没有使EPCs的SOCE进一步降低。结论:抑制EPCs的囊泡转运可以抑制EPCs的增殖并通过下调TRPC1的表达降低SOCE水平。

• 单位
  第三军医大学新桥医院