Rab32对小鼠肝细胞系AML12细胞内脂质代谢的影响

作者：周围; 马莉; 万瑛; 李福祥

来源：第三军医大学学报, 2018, 40(11): 954-958.

DOI：10.16016/j.1000-5404.201802048

• 非酒精性脂肪肝
• AML12细胞
• Rab32
• 脂代谢

目的探讨调控Rab32蛋白表达对小鼠AML12细胞内脂质代谢的影响。方法常规培养AML12细胞,通过转染FCD-EYFP-Rab32慢病毒表达载体构建Rab32过表达细胞系(过表达组),利用CRISPR/Cas9基因敲除技术构建Rab32敲除细胞系(敲除组),正常细胞设为对照组。Western blot检测各组细胞中Rab32蛋白表达水平;尼罗红染色后,激光共聚焦显微镜观测各组细胞内的脂滴数量和面积;定量试剂盒检测各组细胞内甘油三酯及总胆固醇水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果与对照组比较,过表达组AML12细胞中Rab32蛋白表达水平显著上调,而Rab32敲除组细胞中Rab32蛋白表达水平显著下调(P<0.01);过表达组AML12细胞内脂滴数量[过表达组vs对照组:(21.91±14.32)vs(33.89±17.31),P<0.01]及面积[过表达组vs对照组:(16.82±14.37)μm2vs(22.27±14.10)μm2,P<0.01]显著减少,每毫克蛋白甘油三酯[过表达组vs对照组:(104.03±12.28)nmol vs(130.94±4.21)nmol,P<0.01]及胆固醇水平[过表达组vs对照组:(46.92±1.26)μg vs(81.11±0.65)μg,P<0.01]显著降低;而Rab32敲除组细胞内脂滴数量[(58.23±42.28)]及面积[(53.31±36.33)μm2]较对照组显著增加(P<0.01),其每毫克蛋白甘油三酯[(159.03±8.85)nmol]及胆固醇水平[(93.38±3.33)μg]显著增高(P<0.01)。3组细胞凋亡水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论Rab32促进小鼠肝细胞AML12胞内脂质代谢。

• 单位
  第三军医大学; 中国人民解放军陆军军医大学; 中国人民解放军成都军区总医院; 重庆医科大学附属第一医院