内质网应激在维生素E琥珀酸酯诱导的胃癌细胞凋亡和自噬中作用的研究

作者：赵海霞; 段宵阳; 卓翠竹; 闻新奕; 侯丽颖^*

来源：现代预防医学, 2023, 50(22): 4170-4200.

DOI：10.20043/j.cnki.MPM.202306250

• 维生素E琥珀酸酯
• 内质网应激
• 凋亡
• 自噬
• 胃癌细胞

目的 明确内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate, VES)激活人胃癌MKN28细胞自噬和凋亡中发挥的作用。方法 体外培养人胃癌MKN28细胞，不同剂量(5,10,15,20μg/ml)VES处理细胞24小时后，Western blot检测ERS标志物GRP78,自噬标志物LC3、Beclin-1,凋亡相关蛋白Caspase-3和ERS凋亡通路关键信号分子CHOP的表达情况，流式细胞仪检测不同剂量组凋亡率。选择ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid, 4-PBA),ERS激活剂衣霉素(Tunicamycin, TM)自噬激活剂雷帕霉素(Rapamycin, RAPA),设置对照组、4-PBA组(3 mmol/L)、TM组(5μg/ml)、VES组(20μg/ml)、VES+4-PBA组、RAPA组(100 nmol/L),检测GRP78、LC3、Beclin-1、Caspase-3和CHOP蛋白的表达情况，同时检测不同组细胞凋亡率或在电子显微镜下观察自噬体形态。结果 与对照组相比，随着VES作用剂量的上升，ERS标志蛋白GRP78、自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ和凋亡相关蛋白C-Caspase-3均有所增加(F=61.579,P<0.001;F=15.344,P<0.001;F=18.291,P<0.001;F=4.207,P<0.05)。凋亡率检测结果显示，与对照组相比，随着VES剂量的增加，各组凋亡率均上升(F=242.461,P<0.001)。透射电镜图像显示20μg/ml VES组、RAPA组以及TM组出现大量处于不同阶段的自噬体形态。抑制ERS后，VES+4-PBA组GRP78、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3I、C-Caspase-3/Pro Caspase-3较VES组均降低(F=18.799,P<0.001;F=6.643,P<0.01;F=3.492,P<0.05;F=9.436,P<0.01);凋亡率检测结果显示，与VES组相比，VES+4-PBA组的细胞凋亡率降低(F=193.546,P<0.001)。检测ERS凋亡通路关键蛋白CHOP,与对照组相比，随着VES作用剂量的上升，CHOP的表达增加(F=19.720,P<0.001);抑制ERS后，CHOP的表达较VES组降低(F=9.703,P<0.01)。结论 VES可激活人胃癌MKN28细胞发生ERS,诱导胃癌细胞发生自噬和凋亡，ERS能促进细胞自噬的发生且可能通过激活CHOP凋亡途径促进VES诱导的细胞凋亡发生。

• 单位
  华北理工大学; 公共卫生学院