一种来自乳酸乳球菌的新型氨肽酶A的制备及特性分析

作者：田鑫; 刘金洲; 何忠会; 陈琳方; 刘梦元^*

来源：生物工程学报, 2023, 39(08): 3494-3507.

DOI：10.13345/j.cjb.230296

• 氨肽酶A
• 乳酸乳球菌
• 食品工业
• 肉类加工

氨肽酶A (aminopeptidase A, Pep A)能特异性地水解N末端为谷氨酸(glutamic acid, Glu)或天冬氨酸(asparticacid,Asp)的肽链，提高蛋白质的水溶性和食物的风味，在食品工业和肉类加工中具有一定的应用前景。本研究采用全基因合成的方式获得了乳酸乳球菌(Lactococcus lactis ssp.lactis) IL1403氨肽酶A (Lactococcus lactis-Pep A, Lc-Pep A)的编码基因，将该基因克隆并导入毕赤酵母(Pichia pastoris) GS115 (His4)，在毕赤酵母中实现了Lc-Pep A的高效分泌表达，表达产物经鉴定和纯化制备后，进行了生物学特性的分析。结果表明，Lc-Pep A具有较强的底物特异性，对2种底物谷氨酸对硝基苯胺(glutamicacid-p-nitroaniline,Glu-pNA)和天冬氨酸对硝基苯胺(aspartic acid-p-nitroaniline, Asp-pNA)具有相似的催化活力和酶动力学参数。Lc-Pep A是一种金属蛋白酶，最适反应温度为60℃，最适pH为8.0，具有较宽的热稳定性和酸碱稳定性。金属离子Co2+、Mn2+及Zn2+等对酶活力具有不同程度的激活作用，而Ni2+和Cu2+对酶活力具有强烈的抑制作用。Lc-Pep A对常规蛋白酶抑制剂不敏感，但能被金属蛋白酶抑制剂、EDTA及二硫键还原剂抑制。这些研究为Lc-Pep A的生产和指导该酶的应用打下了坚实的基础。

• 单位
  湖北大学; 湖北中医药大学; 生命科学学院