抗人妊娠相关血浆蛋白A单抗的制备、鉴定及化学发光和胶体金检测体系的建立

作者：张兰兰; 于洋; 曹领改; 魏德强^*

来源：中国免疫学杂志, 2020, 36(22): 2753-2758.

• 人妊娠相关血浆蛋白A
• 单克隆抗体
• 化学发光法
• 免疫胶体金

目的:构建抗人妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)单抗细胞株,成功筛选配对抗体后建立PAPP-A双抗体夹心化学发光(CLIA)及免疫胶体金(ICG)检测方法。方法:采用杂交瘤技术获得5株稳定分泌抗PAPP-A单抗的细胞株,将细胞株扩大培养并亲和纯化上清液获得抗体,测定抗体纯度、效价、特异性、表位,建立双抗体夹心CLIA及胶体金体系,并对各体系进行灵敏度、特异性等分析性能评估。结果:获得抗人PAPP-A的杂交瘤细胞株(#13-2-2、#20-1-1、#21-1-1、#44-1-1和#53-2-1)。其分泌的抗体效价均大于10-8 g/ml。化学发光体系在0～10 000 ng/ml范围内线性关系良好,其准确度的回收率为107.2%;灵敏度为9.56 ng/ml;线性相关系数为0.996 6;低高值的变异系数(CV)均小于10%;胶体金体系灵敏度不小于50 ng/ml。两种检测方法与人甲胎蛋白(AFP)、人泌乳素(PRL)、人胎盘催乳素(hPL)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)均不存在交叉。结论:本研究成功制备了抗人PAPP-A单抗,建立了检测PAPP-A化学发光及免疫胶体金体系。该体系为PAPP-A的定量检测和产前诊断等临床应用提供了基础。

• 单位
  东北林业大学; 生命科学学院