目的建立从恩拉霉素预混剂中分离纯化恩拉霉素A和恩拉霉素B的制备高效液相色谱(Pre-HPLC)方法。方法采用正丁醇与酸水反复萃取,利用Pre-HPLC方法对恩拉霉素精制品中的恩拉霉素A和恩拉霉素B进行分离纯化。结果用紫外、质谱和核磁共振法进行结构确证,经分析型HPLC检查,恩拉霉素A和恩拉霉素B的纯度均达98.0%以上。结论由该法制备恩拉霉素A和恩拉霉素B简便、快速,所得产物纯度高,适合于其对照品的制备。