雷帕霉素对甲氨蝶呤诱导急性淋巴细胞白血病EU-4细胞凋亡的影响

作者：张朝霞; 张轶庠; 刘智屏; 陈俐丽; 肖智辉; 李博; 唐希才

来源：中华实用儿科临床杂志, 2017, 32(14): 1101-1103.

DOI：10.3760/cma.j.issn.2095-428X.2017.14.015

• 急性淋巴细胞白血病
• 雷帕霉素
• 甲氨蝶呤

目的探讨雷帕霉素(RAPA)对甲氨蝶呤(MTX)诱导急性淋巴细胞白血病(ALL)EU-4细胞凋亡的影响。方法分别使用5μg/L、10μg/L、25μg/L、50μg/L和100μg/L的RAPA预处理EU-4细胞0.5 h,RAPA未处理组作为对照组,收集细胞,Western blot检测LC-3蛋白,流式细胞技术检测凋亡率。观察不同质量浓度的RAPA预处理对EU-4细胞自噬和凋亡的影响,确定RAPA预处理浓度。将EU-4细胞分为RAPA预处理组和未处理组,分别使用0.05μmol/L、0.10μmol/L和0.20μmol/L的MTX作用24 h,流式细胞技术检测凋亡率,Western blot检测LC-3蛋白,酶标仪测定吸光度(A562),根据标准曲线计算样品的蛋白浓度。结果检测对照组和不同浓度RAPA预处理组的EU-4细胞凋亡率显示,对照组,5μg/L、10μg/L、25μg/L、50μg/L和100μg/L RAPA预处理组EU-4细胞的凋亡率分别为(7.51±0.32)%、(7.33±0.41)%、(7.71±0.51)%、(7.63±0.38)%、(7.80±0.43)%和(16.66±0.87)%,5μg/L、10μg/L、25μg/L和50μg/L RAPA预处理组EU-4细胞的凋亡率与对照组比较差异均无统计学意义(t=0.427、-0.417、-0.297、-3.561,均P>0.05),而100μg/L RAPA预处理组EU-4细胞的凋亡率显著高于对照组,差异有统计学意义(t=-28.815,P<0.01)。根据Western blot和流式细胞技术的检测结果综合考虑,选取50μg/L作为RAPA预处理的浓度。流式细胞技术检测RAPA预处理组和未处理组MTX作用24 h后EU-4细胞的凋亡率显示,RAPA预处理组用0.05μmol/L、0.10μmol/L和0.20μmol/L MTX作用24 h后,EU-4细胞的凋亡率分别为(50.23±2.11)%、(66.88±2.89)%和(73.11±2.67)%,未处理组0.05μmol/L、0.10μmol/L和0.20μmol/L MTX作用24 h后,EU-4细胞的凋亡率分别为(22.53±1.67)%、(42.82±2.26)%和(53.22±1.93)%。相同浓度的MTX作用24 h后,RAPA预处理组EU-4细胞的凋亡率均显著高于未处理组,差异均有统计学意义(t=12.693、66.148、14.429,均P<0.01)。结论 RAPA预处理后,较低剂量的MTX即可诱导急性淋巴细胞白血病EU-4细胞大量凋亡。

• 单位
  深圳市人民医院; 暨南大学; 第二临床医学院; 广州医科大学附属第三医院