多重引物HRMA对成骨不全患者COL1A1/2基因突变的筛查与分析

作者：杨立; 张天可; 周怀蔚; 鞠明艳; 白雪; 李克秋; 任秀智; 李光^*

来源：中国骨质疏松杂志, 2020, 26(08): 1103-1141.

DOI：10.3969/j.issn.1006-7108.2020.08.003

• 成骨不全
• 高分辨熔解曲线分析
• 多重引物高分辨熔解曲线分析
• 点突变
• 突变筛查

目的建立多重引物高分辨熔解曲线分析(high resolution melting analysis,HRMA)方法并运用该方法筛查两例成骨不全(osteogenesis imperfecta,OI) COL1A1/2的突变基因。方法收集两例OI患者临床资料,采集患者及50例正常对照的血液标本。设计COL1A1、COL1A2基因103个外显子所对应的引物,将满足一定条件的两对引物相互配对,与单份样本DNA混合作为扩增体系。运用HRMA筛查产物突变情况,基因测序确定突变位点。结果本研究中共涉及到COL1A1和COL1A2的103个外显子,其中成功配对39对,未配对成功的有3个COL1A1外显子和22个COL1A2外显子,成功率为75. 73%。先证者1筛查结果 HRMA熔解曲线在COL1A1 41号外显子上存在异常,测序结果为c.2877delT杂合突变,即c DNA2 877位碱基T缺失,编码的缬氨酸变成色氨酸。先证者2筛查结果 HRMA熔解曲线在COL1A1 16号外显子上存在异常,测序结果为c.1028delC杂合突变,即c DNA1 028位碱基C缺失,编码的脯氨酸变成亮氨酸。两种突变类型在中国人群中均未见报道,为新发现的两种剪切突变,且与传统HRMA筛查结果一致。结论多重引物HRMA方法在传统HRMA基础上进行了创新,将两对引物与单份样本DNA混合作为扩增体系,HRMA筛查产物突变情况,且与传统HRMA筛查结果一致,具有一定创新性和可行性,为成骨不全患者基因突变及其他遗传病致病基因的筛查提供了新的思路。

• 单位
  天津市武清区人民医院; 天津市天津医院; 基础医学院; 天津医科大学