LINC00205靶向miR-514a-3p/NF-κB对血管平滑肌细胞生物学功能的作用

作者：张闻伯; 高新梅; 王喆; 和传波; 赵强

来源：医学研究生学报, 2021, 34(08): 807-814.

DOI：10.16571/j.cnki.1008-8199.2021.08.005

• LINC00205
• miR-514a-3p
• NF-κB
• 血管紧张素II
• 血管平滑肌细胞

目的 LINC00205是否通过调控miR-514a-3p/NF-κB通路而参与动脉粥样硬化发生过程尚未清楚。文章旨在探讨LINC00205对血管紧张素II(AngII)诱导的血管平滑肌细胞(HA-VSMC)增殖、凋亡、迁移的影响及其对miR-514a-3p/NF-κB通路的调控作用。方法采用AngII诱导的HA-VSMC细胞建立动脉粥样硬化模型为AngII组。将正常培养的细胞作为正常组,将si-con、si-LINC00205、miR-con、miR-514a-3p mimics、anti-miR-con、anti-miR-514a-3p及si-LINC00205与anti-miR-con、si-LINC00205、anti-miR-514a-3p转染至AngII诱导的HA-VSMC细胞,分别为si-con组、si-LINC00205组、miR-con组、miR-514a-3p组、anti-miR-con组、anti-miR-514a-3p组、si-LINC00205+anti-miR-con组、si-LINC00205+anti-miR-514a-3p组。采用qRT-PCR法检测LINC00205、miR-514a-3p的表达量;采用MTT实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、迁移能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测LINC00205与miR-514a-3p的靶向关系;Western blot法检测CyclinD1、MMP2、MMP9、Cleaved-caspase-3、p-p65、p-IкBα、p65、IкBα蛋白表达量。将20只大鼠随机分为对照组(普通喂养)及AS组(蛋氨酸喂养,建立AS模型),检测颈动脉LINC00205、miR-514a-3p、p-p65、p-IкBα、p65、IкBα各蛋白表达。结果与正常组凋亡率比较,AngII组明显降低(P<0.05);与si-con组凋亡率比较,si-LINC00205组明显升高(P<0.05)。AngII组HA-VSMC细胞迁移数较正常组明显升高[(153±14)vs(67±6),P<0.05], si-LINC00205组较si-con组明显降低[(72±7)vs(158±15),P<0.05]。与正常组比较,AngII组CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平明显升高(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平明显降低(P<0.05);与si-con组比较,si-LINC00205组CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平明显降低(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平明显升高(P<0.05)。miR-514a-3p组A值、迁移数、CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平较miR-con组明显降低(P<0.05),凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白水平明显升高(P<0.05);anti-miR-514a-3p组CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平较anti-miR-con组升高(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平降低(P<0.05)。与si-LINC00205+anti-miR-con组比较,si-LINC00205+anti-miR-514a-3p组CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平升高(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平降低(P<0.05)。与对照组比较,AS组LINC00205、p-p65、p-IкBα蛋白水平明显升高(P<0.05),miR-514a-3p蛋白水平降低(P<0.05)。结论 LINC00205表达降低能够有效调控miR-514a-3p/NF-κB通路,从而能够有效抑制因AngII介导的HA-VSMC细胞迁移及繁殖,并可诱导细胞凋亡。

• 单位
  山东第一医科大学