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摘要
【目的】探究组蛋白酶B基因（CtsB）在吉富罗非鱼感染无乳链球菌前后的表达差异，为深入研究罗非鱼抗无乳链球菌感染的免疫应答机制及后续通过SNP分子标记/基因组编辑技术快速获得吉富罗非鱼抗病新品种提供科学依据。【方法】通过RACE克隆罗非鱼CtsB基因cDNA全长序列，使用SMART、Splign、MEGA v6.0、BoxShade及MegAlign等在线软件进行生物信息学及系统进化分析，并以实时荧光定量PCR检测吉富罗非鱼CtsB基因组织表达谱及无乳链球菌感染后CtsB基因的表达变化规律。【结果】吉富罗非鱼CtsB基因cDNA序列全长1746 bp，包括161 bp的5’端非编码区（5’-UTR）、592 bp的3’端非编码区（3’-UTR）及993 bp的开放阅读框（ORF），共编码331个氨基酸残基。基于CtsB氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树显示，吉富罗非鱼与奥利亚罗非鱼的亲缘关系最近，而与鲤鱼、大菱鲆、牙鲆、半滑舌鳎等物种相距较远。CtsB基因在吉富罗非鱼的肝脏、脾脏、鳃、前肾、脑、肠道、皮肤和肌肉等组织中均有表达，且以鳃组织中的相对表达量最高，是其他器官组织的2.0～3.0倍。吉富罗非鱼抗病家系和易感家系感染无乳链球菌后，CtsB基因在脾脏和肾脏中的相对表达量均显著上调（P<0.05），并于感染后50 h达峰值，且抗病家系的上调表达幅度大于易感家系。【结论】CtsB基因在鱼类的进化过程中具有高度保守性，但在不同物种中的表达模式存在明显差异。CtsB基因是吉富罗非鱼的重要免疫因子，在抵御无乳链球菌入侵过程中发挥着重要的免疫作用，可作为罗非鱼抗病育种的SNP分子标记给予开发利用。
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