UHPLC-MS/MS法考察FGF21-164融合蛋白在小鼠体内的药代动力学

作者：陈震东; 高宇雄; 薛皓; 郑元东; 王蓉; 杨美家^*; 钟大放^*

来源：药学学报, 2021, 56(09): 2372-2377.

DOI：10.16438/j.0513-4870.2021-0637

• LC-MS/MS
• FGF21-164融合蛋白
• 药代动力学

FGF21-164是通过对内源性FGF21多肽的结构修饰、偶联得到的融合蛋白,拟用于治疗肥胖引起的糖脂代谢紊乱。本文通过Skyline软件预测得到该蛋白经胰蛋白酶酶解后的候选肽段质谱信息,采用高分辨质谱法验证预测的候选肽段。通过优化超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)法分析条件,选择具有最佳质谱响应的FGF21-164特征替代肽段(YLYTDDAQQTEAHLEIR)。血清样品经磷酸缓冲液稀释后, 60℃变性并烷基化,在37℃下与胰蛋白酶孵育2 h直接酶解产生替代肽段,该肽段在质谱ESI正离子模式检测下,产生特征离子对,即三电荷的母离子m/z 689.3和单电荷的子离子m/z 738.4。色谱分离使用含0.1%甲酸的水溶液(A相)和0.1%甲酸的乙腈溶液(B相),在EclipsePlus C18柱(2.1 mm×50 mm, 1.8μm)上进行,以多反应监测模式对上述离子对监测,以外标法定量分析小鼠血清中FGF21-164融合蛋白的浓度。该方法在2.50～500μg·mL-1内呈良好的线性关系(r=0.998 8),定量下限为2.50μg·mL-1。该方法成功应用于FGF21-164融合蛋白在小鼠体内的药代动力学研究。动物实验经中国科学院上海药物研究所实验动物伦理委员会(批号:20180004040450)批准。药动学实验结果表明,相比于内源性FGF21, FGF21-164融合蛋白在小鼠体内的t1/2由0.5 h延长至2.6 h,有望延长该蛋白的疗效。

• 单位
  中国药科大学; 中国科学院上海药物研究所