miR-133a介导Bcl-xl表达调节内皮细胞的凋亡

作者：张永杰; 林飞; 闫志刚; 刘慧兵; 孙四玉; 王立波; 赵国安^*

来源：医学研究生学报, 2020, 33(08): 814-819.

DOI：10.16571/j.cnki.1008-8199.2020.08.006

• miR-133a
• B淋巴细胞瘤因子2-特大型
• 内皮细胞凋亡
• 动脉粥样硬化

目的 microRNA-133a(miR-133a)参与动脉粥样硬化(AS)病理过程的具体机制不详。文中旨在探究miR-133a参与内皮细胞凋亡的调控过程。方法培养人冠状内皮细胞(HCAECs),分别给予不同浓度(5、15、25、50、75μg/mL)的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)处理12、24 h, MTT法检测细胞活力,筛选文献证实靶向调节抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤因子2-特大型(Bcl-xl)的miRNA。转染细胞48 h后分为:无义序列组(无义序列NC)、过表达组(过表达miR-133a mimics)、沉默无义序列+诱导组(沉默无义序列in NC+ox-LDL诱导HCAECs)、miRNA沉默+诱导组(miR-133a敲减inhibitor+ox-LDL诱导HCAECs)。Western blot法检测抗凋亡蛋白Bcl-xl及活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase3)表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。采用瞬时转染技术过表达及沉默miR-133a,观察其对靶基因Bcl-xl蛋白表达及内皮细胞凋亡的影响。结果 MTT法检测显示,ox-LDL浓度25、50μg/mL的12、24 h细胞活力较0μg/mL降低(P<0.05);ox-LDL 75μg/mL的24 h细胞活力较0μg/mL明显降低(P<0.001)。过表达组细胞中miR-133a表达量(41.80±8.94)较无义序列组(1±0.31)明显增高(P<0.01),miRNA沉默+诱导组细胞中miR-133a表达量(0.20±0.11)较沉默无义序列+诱导组(1±0.11)显著降低(P<0.001)。流式细胞仪检测显示,ox-LDL 75μg/mL的细胞凋亡率[(28.97±3.20)%]较0μg/mL [(8.03±0.73)%]明显升高(P<0.01),miRNA沉默+诱导组细胞凋亡率(18.92±3.00)%]较沉默无义序列+诱导组[(27.1±2.01)%]明显降低(P<0.05),过表达组细胞凋亡率[(14.81±2.60)%]较无义序列组[(8.02±1.22)%]显著增加(P<0.05)。Western blot结果显示,随着ox-LDL浓度(25、50、75μg/mL)增加,抗凋亡蛋白Bcl-xl的表达量逐渐降低,cleaved-caspase3的表达量增加。无义序列组Bcl-xl表达量(1.265±0.049)较过表达组(0.940±0.071)明显升高(P<0.05),沉默无义序列+诱导组(0.795±0.064)较miRNA沉默+诱导组(1.150±0.071)明显降低(P<0.05)。结论 miR-133a靶向调节抗凋亡蛋白Bcl-xl,引起内皮细胞凋亡,促进AS的形成。

• 单位
  新乡医学院第一附属医院