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摘要
目的探讨茶多酚对长波紫外线(ultraviolet A,UVA)、中波紫外线(ultraviolet B,UVB)所致人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblasts,HSF)急性光损伤的防护作用及其对Ⅱ相解毒酶及抗氧化酶mRNA表达的影响。方法不同浓度茶多酚(0、2.5、5、10、20和40 g/ml)孵育HSF细胞24 h,MTT法检测各细胞增殖活性,筛选适宜浓度茶多酚;将HSF细胞分为空白组、药物组、UVA照射组、UVB照射组、UVA+茶多酚组、UVB+茶多酚组,采用2’7’-二氯荧乙酰乙酸盐(2’7’-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平,酶生化法测定各组乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放水平,单细胞凝胶电泳法检测DNA损伤情况,采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测核因子E2相关因子2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)信号通路下游各Ⅱ相解毒酶mRNA的表达情况。结果茶多酚浓度为5μg/ml时,对HSF细胞增殖活性无明显影响,故后续实验采用5μg/ml浓度。与空白对照组相比,UVA及UVB照射组ROS水平、LDH释放水平明显升高,DNA损伤加重;与单纯光照组相比,加茶多酚预处理后行光照组ROS水平、LDH释放水平降低,DNA损伤减轻,差异具有统计学意义(P<0.05);与空白对照组相比,药物组过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(γ-glutamyl cystine ligase catalytic subunit,GCLC)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶调节亚基(γ-glutamyl cystine ligase modulatory subunit,GCLM)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、醌氧化还原酶1(Nuinone oxidoreductase 1,NQO1)的mRNA表达均增加(P<0.05)。结论茶多酚能有效清除ROS,降低LDH水平,减轻DNA损伤,防护UV致HSF细胞急性光损伤,机制可能与其促进Ⅱ相解毒酶及抗氧化物酶mRNA表达相关。
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