HSV_1-TK基因原核表达质粒的构建及其表达检测

作者：王丽群; 张明江; 孟祥晨

来源：生物技术, 2008, (06): 11-14.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2008.06.005

• HSV1-TK基因
• 双歧杆菌
• 原核表达
• 基因治疗 HSV1-TK gene
• bifidobacteria
• prokaryotic expression
• gene therapy

目的:构建含有HSV1-TK基因的原核表达质粒,并对其原核表达情况进行检测,为进一步将细菌载体应用于肿瘤基因治疗奠定基础。方法:以质粒pHSV-106为模板,利用PCR获得HSV1-TK基因克隆并将其与表达载体pBV220连接,重组质粒经鉴定后转化到大肠杆菌DH5α中,并检测其蛋白表达情况。结果:TK基因全长1 128bp,与理论值相符。经测序发现,克隆的DNA片段与TK基因(NCBI登录号:V00470)同源性为100%;但是电泳结果中不能看到目的蛋白条带;因此,进行多次重复及更换宿主等试验以排除试验误差和偏爱密码子的影响;通过更换载体pET-28a确定来源于单纯疱疹病毒的胸苷激酶能够实现原...

• 单位
  东北农业大学; 黑龙江东方学院