鼠白细胞介素-33真核质粒的构建及其在GL261中的稳定表达

作者：孙云; 赵洪洋; 王旋; 熊志勇; 卢高方; 姜晓兵

来源：中华实验外科杂志, 2013, (02): 309-311.

• 白细胞介素-33
• 构建
• 表达

目的构建鼠白细胞介素-33(IL-33)真核表达质粒,建立并检测稳定表达IL-33的细胞株GL261。方法从Genebank找出鼠IL-33基因全长序列(801 bp),人工合成、装载于表达载体pEZ-M03,扩增后酶切鉴定。将鉴定正确的质粒转染的小鼠胶质瘤细胞GL261,并用浓度为200 mg/L的G418筛选出阳性克隆,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测目的基因表达量;Western blot法检测目的蛋白的表达量,并观察转染后的GL261细胞体外生长状况。结果成功构建鼠IL-33真核质粒pEZ-M03-mIL33,经过浓度为20mg/L的G418工作液筛选出了稳定高表达鼠IL-33的细胞株GL261,且其生长状态未受到转染基因的影响(P>0.05)。Real-time PCR检测目的基因在瞬转、稳转细胞株中皆为高表达(P<0.01)。Western blot检测到稳转细胞株中目的蛋白明显高表达(P<0.01)。结论本研究构建的鼠IL-33真核质粒能于GL261中获得稳定高表达。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属协和医院