花生致敏蛋白Ara h 1双抗体夹心ELISA法的建立

作者：王耀; 陈曦; 武汉良; 卫星; 张国庆; 张淑霞; 刘胜男^*

来源：食品与机械, 2020, 36(07): 59-113.

DOI：10.13652/j.issn.1003-5788.2020.07.012

• 花生
• Ara h 1蛋白
• 双抗体夹心法
• 酶联免疫吸附

为建立用于花生致敏蛋白Ara h 1快速、灵敏、特异检测的双抗体夹心ELISA法,以Ara h 1鼠源单抗(mAb)为捕获抗体,以Ara h 1兔源多抗(pAb)为检测抗体,通过棋盘法优化抗体工作浓度建立方法,并对方法的灵敏度、特异性、准确度、稳定性等检测特性进行鉴定。结果表明,双抗体夹心ELISA法的mAb和pAb最佳工作浓度分别为1∶10 000稀释和1∶8 000稀释;ELISA标准曲线线性范围为4～256ng/mL,检测限为4.16ng/mL;样品添加回收试验的平均回收率为85.9%～94.5%,且该方法与其他常见致敏蛋白无交叉反应;并能在4℃条件下避光密封保存90d内保持检测结果稳定。说明所建立的双抗体夹心ELISA法灵敏特异、准确稳定,能够用于花生致敏蛋白Ara h 1的快速筛查。

• 单位
  食品与生物工程学院; 河南科技大学