红麻miR394基因的克隆及CRISPR/Cas9载体构建

作者：史奇奇; 李增强; 韦范; 汤丹峰; 贾瑞星; 谢红英; 周瑞阳; 陈鹏

来源：中国农业大学学报, 2019, (01): 14-21.

• 红麻
• CRISPR/Cas9
• miR394
• 原生质体 kenaf
• protoplast

为探明miRNA在红麻中的功能,以红麻基因组DNA为模板,根据红麻microRNA(miRNA)高通量测序数据结果,克隆红麻miR394前体基因序列,并构建CRISPR/Cas9载体。结果表明红麻miR394前体基因序列大小为175bp,用Mfold在线软件分析,其前体序列能形成稳定的二级结构。根据红麻miR394前体基因序列,设计合适的CRISPR/Cas9靶标序列,利用改良的CRISPR/Cas9多靶点载体系统,以AtU3b和AtU6-29质粒为模板,使用Overlapping PCR法构建AtU3b-sgRNA和AtU6-29-sgRNA表达盒,使用Golden Gate Cloning...

• 单位
  广西大学