M3受体在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素诱导人肺微血管内皮细胞损伤中的作用

作者：刘强胜; 颜学滔; 刘安鹏; 袁清红; 沈石文; 郑菲; 张宗泽; 陈凯; 王焱林; 詹佳^*

来源：中华麻醉学杂志, 2018, 38(08): 996-1000.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0254-1416.2018.08.026

• 受体,毒蕈碱M3
• 胆碱能拮抗剂
• 内毒素类
• 内皮细胞

目的评价M3受体在盐酸戊乙奎醚(PHC)减轻内毒素(LPS)诱导人肺微血管内皮细胞损伤中的作用。方法正常人肺微血管内皮细胞和M3 shRNA转染人肺微血管内皮细胞,以1×105个/ml的密度接种于6孔板(2 ml/孔)或培养瓶(4 ml/瓶)中,采用随机数字表法分为5组(n=5):对照组(C组)、LPS组、PHC+LPS组(P+LPS组)、LPS+M3 shRNA转染组(LPS+shRNA组)和PHC+LPS+M3 shRNA转染组(P+LPS+shRNA组)。C组不给予药物处理;余各组均加入终浓度为0.1μg/ml LPS;P+LPS组和P+LPS+shRNA组于加入LPS前1 h加入PHC 2μg/ml;LPS+shRNA组和P+LPS+shRNA组以含2.5 nmol/L M3受体shRNA的质粒转染细胞。加入LPS后1 h时,采用流式细胞仪测定内皮细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)的含量;免疫荧光法检测肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的表达;Western blot法检测NF-κB p65和IκB的表达;ELISA法测定TNF-α和IL-6的含量;实时定量PCR法分别检测加入LPS后10、30和60 min时M3受体mRNA表达水平。结果与C组比较,LPS组和P+LPS组F-actin含量降低,VE-cadherin和IκB表达下调,TNF-α和IL-6含量升高,MLCK和NF-κB p65表达上调(P<0.05);与C组比较,LPS组M3受体mRNA表达上调(P<0.05),P+LPS组差异无统计学意义(P>0.05);与LPS组比较,P+LPS组和LPS+shRNA组F-actin含量升高,VE-cadherin和IκB表达上调,TNF-α和IL-6浓度降低,MLCK、NF-κB p65和M3受体mRNA表达下调(P<0.05);与P+LPS组比较,P+LPS+shRNA组F-actin含量升高,VE-cadherin和IκB表达上调,TNF-α和IL-6浓度降低,MLCK、NF-κB p65和M3受体mRNA表达下调(P<0.05)。结论 PHC可通过干扰M3受体,抑制NF-κB介导炎性反应,减轻LPS诱导的人肺微血管内皮细胞损伤。

• 单位
  武汉大学中南医院; 深圳市宝安区妇幼保健院