YAP精氨酸甲基化修饰调控Hippo通路及肿瘤细胞增殖

作者：赵圆圆; 朱跃; 裴华东^*; 陈亚丽^*

来源：军事医学, 2019, 43(11): 851-857.

• YAP
• 非小细胞肺癌
• 精氨酸甲基化修饰
• Hippo通路
• 肿瘤细胞增殖

目的探讨yes相关蛋白(YAP)精氨酸甲基化修饰对Hippo通路激活及肿瘤细胞增殖的影响。方法在HEK293T细胞中过表达并纯化FLAG-YAP,通过质谱鉴定YAP的精氨酸甲基化修饰及其修饰位点;Western印迹法和体外激酶反应检测YAP精氨酸甲基化修饰对YAP 127位丝氨酸(S127)磷酸化修饰的影响;免疫荧光染色法检测YAP精氨酸甲基化修饰对其核定位的影响。利用慢病毒载体系统构建敲低YAP蛋白的稳定细胞株,在敲低YAP的稳定株中分别回补YAP野生型及其修饰位点突变体,荧光实时定量PCR(q-RT-PCR)检测Hippo通路下游靶基因转录情况,MTS[3-(4,5-dimethylthiaol-2-yl)-5-(3-car-boxy-methoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazoliu-m,inner salt]实验和克隆形成实验检测YAP精氨酸甲基化修饰对肿瘤细胞增殖能力的影响。结果质谱结果显示YAP 124位精氨酸(R124)存在单甲基化修饰,并受细胞所处营养状况的调控;经体外激酶反应、Western印迹和斑点印迹杂交(Dot blot)验证,YAP R124单甲基化修饰能抑制YAP S127的磷酸化修饰;免疫荧光染色实验证实,YAP R124甲基化修饰促进YAP蛋白入核;q-RT-PCR结果表明,YAP R124甲基化修饰激活Hippo通路下游靶基因转录;MTS和克隆形成实验证实,YAP R124甲基化修饰促进肿瘤细胞的增殖。结论 YAP R124单甲基化修饰能抑制YAP S127的磷酸化修饰,促进YAP蛋白进入细胞核,激活Hippo通路下游靶基因转录,进而促进肿瘤细胞增殖。

• 单位
  北京蛋白质组研究中心; 西安交通大学第一附属医院; 安徽医科大学; 蛋白质组学国家重点实验室