奶牛妊娠相关糖蛋白2的表达及结构功能预测分析

作者：杨亚军; 何金科; 白天鸽; 宋胜男; 杨宁宁; 陈创夫^*; **^*

来源：中国畜牧兽医, 2020, 47(10): 3039-3048.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2020.10.001

• 妊娠相关糖蛋白
• 原核表达
• 抗原表位
• 信号肽

为了获得高效表达纯化并且抗原性较好的牛妊娠相关糖蛋白2(bovine pregnancy-associated glycoprotein 2,BoPAG2),对该蛋白的结构与功能进行生物信息学预测分析。通过PCR扩增荷斯坦奶牛BoPAG2基因,并将该基因连接至表达载体pET-28a,转化至大肠杆菌(BL21)中诱导表达并纯化,通过SDS-PAGE和Western blotting验证与检测该蛋白的大小和免疫学特性,通过生物信息学对BoPAG2蛋白的糖基化修饰、B细胞抗原表位、亲水性、信号肽,蛋白二级结构和3D模型、保守结构域以及蛋白互作进行预测分析。结果表明,本研究成功克隆出BoPAG2基因,通过诱导表达并纯化相应蛋白,通过SDS-PAGE和Western blotting验证BoPAG2蛋白的大小与预期结果相符,通过生物信息学预测分析结果显示,BoPAG2蛋白有5个位点发生糖基化修饰,分别为Asp51、Asp71、Asp114、Asp252和Asp343,该蛋白含有15个B细胞抗原表位,在N端含有15个氨基酸组成的信号肽序列,二级结构主要以无规则卷曲和延伸链为主,并且成功建立了BoPAG2蛋白的3D模型,该蛋白含有4个超家族结构域,蛋白互作分析结果显示,与BoPAG2互作的蛋白有7个,该蛋白可能参与了消化和吸收,以及母体在妊娠期的调节功能等过程。综上所述,本试验成功表达并纯化获得了BoPAG2蛋白。通过对BoPAG2蛋白的结构及功能进行生物信息学预测分析,为BoPAG2蛋白抗体的制备以及功能的研究提供了理论基础。

• 单位
  生命科学学院; 石河子大学; 动物科技学院