摘要
目的观察冬凌草甲素对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响,并探讨其诱导HeLa细胞线粒体凋亡的机制。方法体外培养HeLa细胞,分别以0μmol/L (设为空白对照组)、5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L冬凌草甲素处理12 h、24 h、36 h、48 h,CCK-8法检测HeLa细胞活力,计算IC50。以0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L冬凌草甲素处理HeLa细胞24 h,采用Annexin V/PI双染法和TUNEL染色分别检测HeLa细胞凋亡;JC-1染色检测线粒体膜电位(Δψm)改变;Western blotting检测细胞色素c(Cyt c)、B细胞淋巴瘤-2因子(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达;比色法检测半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)活性。结果冬凌草甲素抑制HeLa细胞细胞活力呈剂量-时间依赖效应(P <0.05),其12 h、24 h、36 h、48 h的IC50分别为95.63μmol/L、32.24μmol/L、19.58μmol/L和4.13μmol/L;与空白对照组比较,5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L冬凌草甲素组HeLa细胞凋亡率和凋亡指数升高(P <0.05);与空白对照组比较,5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L冬凌草甲素组HeLa细胞Δψm降低(P <0.05);与空白对照组比较,5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L冬凌草甲素组HeLa细胞Cyt c、Bax表达升高(P <0.05),Bcl-2、Bcl-2/Bax比值降低(P <0.05);与空白对照组比较,5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L冬凌草甲素组HeLa细胞Caspase-3、Caspase-9活性升高(P <0.05)。结论冬凌草甲素可诱导HeLa细胞凋亡,其机制可能是通过线粒体凋亡途径实现。
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单位牡丹江医学院附属红旗医院