人偏肺病毒的逆转录重组酶介导等温扩增荧光检测方法的建立

作者：焦素黎; 谢蕾; 毛洋; 倪红霞; 李永东^*

来源：中国人兽共患病学报, 2023, 39(08): 780-783.

• 人偏肺病毒
• 重组酶介导的等温扩增
• 分子检测
• 检测效果

目的 建立一种基于逆转录重组酶介导的等温扩增(reverse transcription recombinase-aided isothermal amplification, RT-RAA)方法的人偏肺病毒快速分子诊断技术，并对其检测效果进行初步分析。方法 从NCBI数据库中下载人偏病毒基因组序列，利用Mega软件比对分析基因组序列，确定高度保守序列作为分子检测靶标。以人偏肺病毒N蛋白基因保守序列作为靶序列，设计引物和荧光探针。并以宁波地区人偏肺病毒基因组RNA为模板，利用实时荧光定量PCR对荧光RT-RAA检测体系进行评价。以构建含有N蛋白基因序列的不同浓度重组质粒为模板进行RT-RAA荧光扩增，分析其检测灵敏性；利用建立的RT-RAA荧光法分析检测人偏肺病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒和博卡病毒基因组，评价其检测特异性。结果 成功建立了人偏肺病毒RT-RAA扩增荧光检测方法，可在30 min内完成偏肺病毒的特异性扩增检测。以重组质粒为检测模板，RT-RAA荧光检测法的最低检出限为102拷贝/μL重组质粒，且均在15 min内出现阳性特异性扩增。与实时荧光定量PCR检测一致性达98.6%,且与其他3种病毒无交叉反应特性。结论 成功建立了一种基于RT-RAA扩增的人偏肺病毒荧光检测方法，该方法灵敏度高、特异性好，在人偏病毒快速现场检测中具有潜在应用价值。

• 单位
  宁波市疾病预防控制中心